陳立偉 于仁峰

　　聯(lián)勤保障部隊第九六五醫(yī)院

　　摘要：免疫層析技術（ICA）是一種將抗原抗體特異性反應與色譜層析技術相結合的新型膜檢測分析方法，是目前最常用的即時檢驗技術（POCT）。此類技術除了具有操作簡易、反應迅速和時耗較短等特點外，還兼具低成本和高特異性，尤其適用于臨場檢測。20 世紀90 年代以來，免疫層析技術在醫(yī)學檢測領域、獸藥殘留檢測、環(huán)境監(jiān)測、疾病診斷等多個方面都有廣泛的應用。隨著科技的發(fā)展，標記材料不斷更新?lián)Q代，熒光材料、磁性納米顆粒等新型的標記材料逐漸應用到ICA 中。標記材料的變化和分析儀器的應用推動ICA 方法向高靈敏度和定量檢測的方向發(fā)展。

　　關鍵詞：免疫層析技術；膠體金；免疫熒光材料

　　免疫層析法（Immunochromatography）是20 世紀80 年代初期在國外興起的一種快速診斷技術，該分析技術操作簡單、快速、便捷、結果易于判斷、無須特殊的檢測設備[1]。隨著各類新技術的發(fā)展，免疫層析技術也在不斷更新?lián)Q代，標記物的改良使得結合墊上的標記物多種多樣，從傳統(tǒng)的膠體金材料到熒光納米微粒、熒光微球、量子點等標記物的開發(fā)利用，免疫層析技術也迎來了新的發(fā)展篇章。

　　1 免疫層析技術的標記材料

　　免疫層析技術關鍵在于依靠標記抗體的免疫標記材料，標記材料的良好特性有助于提高和判斷免疫層析檢測的靈敏度和效果，因而免疫層析的發(fā)展取決于免疫標記材料的發(fā)展進步。

　　1.1 膠體金免疫層析

　　檢測于1 測出沙門菌表面抗原而提出。在人類醫(yī)學和動物醫(yī)學的臨床檢驗、疾病檢測、食品安全檢測以及其他相關領域中，膠體金技術都有相當廣泛的應用。在動物性食品安全檢測、動物疾病的臨床檢測及防控上，近年來膠體金試紙條也有大量的創(chuàng)新和應用，為生產(chǎn)管理提供了便利。

　　1.2 以新材料為標記物的免疫層析

　　雖然目前市場上的主流側(cè)向?qū)游霎a(chǎn)品還是基于膠體金技術的試紙條，但是隨著材料技術的不斷發(fā)展，越來越多的以各類納米熒光材料為主的新標記材料被開發(fā)應用于側(cè)向免疫層析，效果卓著。

　　1.2.1 熒光微球免疫層析

　　用于熒光微球免疫測定（FMIA）的微球材料常見的有硅、磁、硒及高分子材料等，直徑在納米級到微米級間。相比于最早的熒光素標記法，微球可以較好地保護熒光物質(zhì)，增加熒光的穩(wěn)定性。近年也已發(fā)展出了用于免疫層析的新型聚集誘導發(fā)射熒光微球（AIEFM）。

　　1.2.2 量子點

　　量子點被認為是免疫層析中最有前途的熒光半導體納米材料，與一般熒光染料相比，量子點具有尺寸可調(diào)的熒光。

　　1.2.3 上轉(zhuǎn)換發(fā)光技術

　　上轉(zhuǎn)換發(fā)光技術即以稀土金屬元素（主要是鑭系）構成的納米或亞微米顆粒作為標記物的免疫層析技術。雷萌等研制基于上轉(zhuǎn)換納米熒光快速定量檢測降鈣素原的免疫層析檢測技術，基于上轉(zhuǎn)換發(fā)光尤其適用于復雜樣本的檢測的特點，可以開發(fā)基于上轉(zhuǎn)換發(fā)光的多聯(lián)檢測試紙條。

　　1.2.4 磁性納米微球

　　基于超順磁納米顆粒（MNPs）作為標記物的免疫層析方法，利用磁信號分析儀（MAR）實現(xiàn)對膜上信號的完整讀取，取代免疫層析法中傳統(tǒng)測試儀去讀取可見光或熒光，不用去考慮膜的厚度問題，這樣可以把靈敏度提高10-1000 倍，而且試紙條在長時間放置后磁信號并不會有明顯損失，生物材料中有鮮有磁信號。

　　1.2.5 適配體

　　傳統(tǒng)的免疫層析法用抗體作為標記物和捕獲物，現(xiàn)在隨著指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進化技術（SELEX）的應用，配對的適配體也逐漸篩選出來。適配體相對于傳統(tǒng)的抗體來講，具有諸多的優(yōu)勢：篩選周期短，親和力和穩(wěn)定性高，由于適配體的諸多優(yōu)點以及SELEX 技術的逐漸成熟應用，在免疫層析上用適配體來代替抗體檢測是一個好的方向。

　　2 免疫層析技術的應用

　　近年來，由于環(huán)境變化，科技發(fā)展，人與人交流廣泛，各種感染性疾病流行，基層現(xiàn)場即時檢測（POCT）需求迅速增長。在POCT 眾多檢測手段中，免疫層析技術具有操作簡單、檢測快捷、結果可直接讀取等優(yōu)點，并且隨著新興納米熒光材料的引用，免疫層析技術的檢測靈敏性和準確性也有顯著提高，近年來也越來越多的應用于醫(yī)學檢測等領域。

　　2.1 醫(yī)學領域

　　在醫(yī)學檢測領域，人HCG 膠體金診斷試紙條已作為早孕初篩方式被廣為應用，成為免疫層析法檢測試紙條最好的應用實例。隨著納米熒光材料的引入及更新?lián)Q代，免疫層析技術也有了飛躍的發(fā)展，在醫(yī)療領域有了更廣泛的應用。

　　2.2 食品安全領域

　　隨著人類社會的迅速進步，越來越多的食品原材料被搬入餐桌，同時，食品安全問題也得到越來越多的關注。近年來，食物安全問題已給人類帶來巨大的困擾。免疫層析技術的引入解決了這一難題。檢測食品毒性及農(nóng)藥殘留等方面的免疫層析試紙條能夠快速讀取檢測結果，方便大眾操作。

　　2.3 環(huán)境監(jiān)測領域

　　近年來，環(huán)境污染已成為重大的威脅人類健康生存的問題。隨著人們關注度的提高及免疫層析技術材料的更新?lián)Q代，也逐漸擴大免疫層析技術在環(huán)境監(jiān)測領域的適用性。

　　3 結論和展望

　　本綜述介紹了免疫層析法的主要標記物種類及其在POCT 的應用，經(jīng)過幾十年的發(fā)展，從最初的膠體金，到后來的量子點、稀土發(fā)光材料、上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料、超順磁納米微球和適配體等，以及本文中還未提及的脂質(zhì)體等材料，各種材料都被人們發(fā)現(xiàn)并運用，使得免疫層析得到長足的發(fā)展和廣泛應用。定量、提高靈敏度、多聯(lián)檢測和環(huán)保是未來依然要努力的方向?？傊喾N多樣的標記材料已經(jīng)在免疫層析法上有所使用，也各自展現(xiàn)了自己的優(yōu)勢和劣勢，應進一步對此深入研究，以使得其更好地應用于臨床檢測、食品檢測和環(huán)境監(jiān)測等。

　　參考文獻：

　　[1]Wang L, Lu D, Wang J, et al. A novel immunochromatographic electrochemical biosensor for highly sensitive and selective detection of trichloropyridinol, a biomarker of exposure to chlorpyrifos[J].Biosensors & Bioelectronics: The International Journal for the Professional Involved with Research, Technology and Applications of Biosensers and Related Devices,2011,26(6):2835-2840.

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